تکنیک رنگآمیزی جونز برای غشاء پایه
تکنیک رنگآمیزی جونز (JONES’ METHOD) یکی از روش‌های کاربردی در آزمایشگاه‌های هیستولوژی است. این تکنیک جهت بررسی هیستولوژیکی غشاء پایه و رشته‌های رتیکولر به کار می‌رود و برای رنگآمیزی غشاء پایه‌ی گلومرولی کلیوی در بیوپسی کلیه، کاربرد دارد.
در این مقاله قصد داریم شما را با مواد و محلول‌های مورد استفاده در تکنیک رنگآمیزی جونز آشنا کرده و روش این آزمایش و نتایج حاصل از آن را بیان کنیم. پس در ادامه با ما همراه باشید.
مروری بر تکنیک رنگ آمیزی جونز
تکنیک رنگآمیزی جونز (JONES’ METHOD ) یک روش رنگآمیزی کاربردی در آزمایشگاه‌ها است. این روش با نام متنامین پاس (methenamine silver-Periodic acid-Schiff) یا MPAS نیز نامیده می‌شود.
این تکنیک رنگآمیزی به طور گسترده برای بررسی بیماری‌های کلیوی کاربرد دارد. گلومرول‌ها ساختارهایی در کلیه‌ها هستند که از رگ‌های خونی بسیار ریز ساخته شده‌اند. این رگ‌ها به تصفیه‌ی خون و حذف مایعات اضافه کمک می‌کنند. در صورتی که گلومرول آسیب ببیند، کلیه‌ها نمی‌توانند بطور مناسب عمل کنند و ممکن است نارسایی کلیوی برزو کند.
به کمک تکنیک رنگ آمیزی جونز می‌توان غشاء گلومرولی را بررسی کرد و از آسیب‌های وارد شده به آن آگاه شد.
مواد و محلول‌ها
- فیکساتیو: بافر فرمالین خنثی 10%
- نمونه: قطعات برش خورده بافت پارافین‌گیری شده به قطر 2-3 μm
- محلول پریودیک اسید 0/5%
پریودیک اسید————– 0/5 گرم
آب مقطر—————— 100/0 میلی‌لیتر
- تیوسمی کاربازید[1] 5/0%
تیوسمی کاربازید———— 0/5 گرم
آب مقطر—————— 100/0 میلی‌لیتر
- محلول نیترات نقره 5%
نیترات نقره—————- 1/0 گرم
آب مقطر—————– 20/0 میلی‌لیتر
- محلول متنامین 3%
هگزا متیلن تترا آمین (متنامین)——- 12/0 گرم
آب مقطر————————- 375/0 میلی‌لیتر
اتیلن گلیکول——————— 25/0 میلی‌لیتر
- محلول استوک متنامین سیلور نیترات
محلول نیترات نقره 5%————– 20/0 میلی‌لیتر
محلول متنامین 3%—————– 400/0 میلی‌لیتر
*اگر این محلول در یخچال با دمای 3 تا 6 درجه‌ی سانتی‌گراد نگهداری شود، حدودا یک ماه پایدار می‌ماند.
- محلول متنامین سیلور نیترات (برای استفاده در طول رنگآمیزی)
استوک متنامین سیلور نیترات——————– 20/0 میلی‌لیتر
آب مقطر————————————- 20/0 میلی‌لیتر
محلول سدیم بورات 3%————————– 2/0 میلی‌لیتر
*این محلول را به صورت تازه آماده کنید.
محلول سدیم بورات 3% (بوراکس)
سدیم بورات——————— 3/0 گرم
آب مقطر ———————– 100/0 میلی‌لیتر
- استوک کلرید طلا 1%
کلرید طلا——————————— 1/0 گرم
آب مقطر———————————- 100/0 میلی‌لیتر
- محلول کلرید طلای 2/0% (برای استفاده در طول رنگآمیزی)
استوک کلرید طلای 1%————————- 20/0 میلی‌لیتر
آب مقطر———————————— 80/0 میلی‌لیتر
- محلول سدیم تیوسولفات 2%
سدیم تیوسولفات———————————- 2/0 گرم
آب مقطر—————————————– 100/0 میلی‌لیتر
- محلول نوکلئار فست رد 1/0%
0/1 گرم پودر نوکلئار فست رد را به کمک گرما در 100 میلی‌لیتر از محلول آلومینیوم سولفات 5% حل کنید. بگذارید خنک شود، آن را تصفیه کنید و مقداری تیمول به عنوان نگهدارنده به آن اضافه کنید.
مراحل رنگآمیزی جونز
- مراحل پارافین زدایی و هیدراسیون را با آب مقطر انجام دهید.
- قطعات پارافینی را به مدت 10 دقیقه در محلول پریودیک اسید 0/5% قرار دهید و سپس چهار مرتبه با آب مقطر آبکشی کنید.
- لام را به مدت 5 دقیقه در تیوسمی کاربازید 0/5% قرار دهید و سپس چهار مرتبه با آب مقطر آبکشی کنید.
- لام را در محلول متنامین سیلور نیترات قرار داده و آن را به همراه جار رنگآمیزی درون بن ماری با دمای 43 درجه‌ی سانتی‌گراد قرار دهید. پس از دو دقیقه دمای بن ماری را به 58 درجه‌ی سانتی‌گراد برسانید.
- لام را با آب مقطر آبکشی کرده و آن را با میکروسکوپ بررسی کنید. در این مرحله، غشاء پایه باید قهوه‌ای تیره باشد و اگر خیلی روشن است، به مدت 1 یا 2 دقیقه لام را مجددا در محلول متنامین سیلور نیترات داغ قرار دهید و لام را دوباره بررسی کنید. از آنجایی که واکنش رنگآمیزی به سرعت اتفاق می‌افتد، باید دقت داشته باشید که غشاء پایه بیش از حد تغییر رنگ ندهد.
- لام را چهار مرتبه با آب مقطر آبکشی کنید.
- به مدت 1 دقیقه در کلرید طلای 0/2% قرار دهید و سپس دو مرتبه با آب مقطر آبکشی کنید.
- لام را به مدت 1 دقیقه در سدیم تیو سولفات 2% قرار دهید و سپس چهار مرتبه با آب مقطر آبکشی کنید.
- لام را به مدت 3 دقیقه در محلول نوکلئار فست رد قرار دهید و سپس سه مرتبه با آب مقطر آبکشی کنید.
- در نهایت مراحل دهیدراسیون را در الکل‌های درجه‌بندی شده انجام دهید.
- مراحل شفاف سازی با زایلین را انجام دهید و لام را با رزین مصنوعی فیکس کنید.
بررسی نتایج در تکنیک رنگآمیزی جونز
- غشاء پایه—————————————- سیاه
- رشته‌های رتیکولر——————————- سیاه
- هسته——————————————- قرمز
توضیحات
در تکنیک رنگآمیزی جونز، قرار دادن لام‌ها در تیوسمی کاربازید سرعت واکنش متنامین سیلور با غشاء پایه‌ی گلومرولی را بالا می‌برد. همچنین این کار باعث صرفه‌جویی در وقت شده و نتایج بهتری را حاصل می‌کند.
افزودن اتیلن گلیکول به محلول متنامین سیلور نیترات گرم‌شده، باعث پایداری آن می‌شود. بیشتر اوقات این کار مانع از تشکیل یک لایه‌ی نقره روی لام‌ها و شیشه‌ی کوپلین می‌گردد.
جمع بندی
به طور کلی، تکنیکهای رنگآمیزی در بافت‌شناسی کاربرد زیادی دارند و در آزمایشگاه‌ها از آن‌ها استفاده می‌شود. با استفاده از این تکنیک‌ها، آسیب‌شناسان و محققان قادر هستند تا ساختار بافت را زیر میکروسکوپ مشاهده کنند و با توجه به هدف آزمایش، اطلاعات لازم برای نتیجه‌گیری را دریافت کنند. در این مطلب ما سعی کردیم تا تکنیک رنگآمیزی جونز را که برای رنگآمیزی غشاء پایه‌ی گلومرولی کلیوی مناسب است، شرح دهیم و همچنین نکات و توصیه‌هایی را برای انجام هر چه دقیق‌تر این آزمایش، در اختیار شما قرار دهیم.
امیدواریم این مطلب مورد توجه شما قرار گرفته باشد.
واژه نامه:
| Thiosemicarbazide | [1] |
