مروری بر محیط کشت CIN ، ترکیبات و موارد استفاده از آن
محیط کشت CIN آگار با نام یرسینیا آگار (Yersinia Agar) نیز شناخته می‌شود. این آگار، یک محیط کشت انتخابی و افتراقی است که برای جداسازی انتخابی و شناسایی گونههای یرسینیا، به ویژه سویه های Yersinia enterocolitica استفاده می‌شود. در ادامه قصد داریم به بررسی این محیط کشت و نحوه استفاده از آن بپردازیم. پس در ادامه با ما همراه باشید.
یرسینیا چیست و چه بیماری‌هایی ایجاد می‌کند؟
همانطور که در قسمت مقدمه گفته شد، محیط کشت CIN بیشتر در شناسایی گونههای یرسینیا به ویژه یرسینیا انتروکولیتیکا کاربرد دارد.
یرسینیا انتروکولیتیکا یک باسیل گرم منفی شکل است که باعث بیماری مشترک بین انسان و دام به نام یرسینیوز (yersiniosis) می‌شود. عفونت به صورت اسهال حاد، التهاب غدد لنفاوی (آدنیت مزانتریک)، و شبه آپاندیسیت ظاهر می‌شود. در موارد نادر، حتی می تواند باعث سپسیس شود. طی چند دهه گذشته، عفونت‌های یرسینیا در بسیاری از نقاط جهان بسیار رایج شده است.
از آنجایی که اکثر بیماران مبتلا به عفونت یرسینیا به بخش اورژانس مراجعه می‌کنند، پرستاران و پزشکان بخش اورژانس باید این بیماری و نحوه تشخیص آن‌را بشناسند.
مروری بر محیط کشت CIN
یرسینیا آگار برای اولین بار توسط Schiemann D.A. در سال 1979فرموله و توصیف شد. در ابتدا سفسولودین، ایرگاسان، نووبیوسین، کریستال ویوله و نمک‌های صفراوی به عنوان اجزای اصلی این محیط کشت شناخته می شدند. اما بعدها چند جزء دیگر برای افزایش کارایی محیط کشت CIN به آن اضافه گردید. در بخش‌های بعدی این مطلب به بررسی اجزای تشکیل دهنده این محیط کشت خواهیم پرداخت.
کاربرد اصلی محیط کشت CIN
یرسینیا آگار اغلب برای جداسازی و شناسایی انتخابی سویه‌های یرسینیا انتروکولیتیکا از نمونه‌های مدفوع (نمونه‌های بالینی) و نمونه‌های غذا مورد استفاده قرار می‌گیرد.
اصول یرسینیا آگار
محیط کشت CIN حاوی اجزای مختلفی است. مهارکننده و آنتی بیوتیک‌های موجود در این محیط کشت رشد باکتری‌های گرم مثبت و بسیاری از باکتری‌های گرم منفی را سرکوب می‌کنند. علاوه‌بر این، وجود یک شاخص امکان شناسایی احتمالی کلنی‌های Yersinia enterocolitica را فراهم می‌کند.
ترکیب CIN آگار
ترکیبات محیط کشت CIN از گذشته تا کنون تغییراتی داشته است و در حال حاضر نیز انواع مختلفی از این محیط کشت در دسترس است. در ادامه به بررسی یکی از انواع ترکیبات این محیط کشت خواهیم پرداخت.
اکثر شرکت‌ها یک محیط CIN Agar را به عنوان پایه به همراه بمسری مکمل عرضه می‌کنند. پایه آگار شامل تمام اجزاء به جز اجزای ضد میکروبی است. سفسولودین، ایرگاسان و نووبیوسین، به صورت جداگانه به عنوان مکمل‌های انتخابی عرضه می‌شوند. زیرا نمی‌توانند مانند سایر اجزای محیط کشت اتوکلاو شوند.
از آنجایی که ترکیبات مختلفی برای این محیط کشت وجود دارد، بهتر است برای انتخاب محیط کشت مناسب، دستورالعمل‌های آزمایشگاه خود مراجعه کنید.
اجزای محیط کشت CIN آگار
جدول 1 ترکیبات محیط کشت CIN را نشان می‌دهد.
|
نام ماده (فارسی) |
نام ماده (انگلیسی) | مقدار |
| پپتون ویژه (اکسوئید) | Special Peptone (Oxoid) | 20g |
| عصاره مخمر | Yeast Extract (Difco) | 2g |
| مانیتول | Mannitol | 20g |
| اسید پیروویک (نمک سدیم) | Pyruvic Acid (Sodium salt) | 2g |
| کلرید سدیم | Sodium Chloride | 1g |
| سولفات منیزیم | Magnesium sulfate.7H2O | 10mg (10 mL of 0.1% stock solution) |
| آگار | Agar (Oxoid No. 4) | 12g |
| ایرگاسان | Irgasan DP300 | 10ml of 0.04% in 95% ethanol |
| نمک های صفراوی | Bile salts (Difco) | 2g in 200 mL distilled water |
| NaOH | NaOH | 1ml of 5N NaOH solution |
| قرمز خنثی | Neutral Red | 10ml of 3 mg/mL solution |
| کریستال ویوله | Crystal Violet | 10ml of 0.1 mg/mL solution |
| سفسولودین | Cefsulodin | 10ml of 1.5 mg/mL solution |
| نووبیوسین | Novobiocin | 10ml of 1.5 mg/mL solution |
| pH نهایی 7.4 | ||
کریستال ویوله و سدیم دئوکسی کولات (نمک صفراوی) موجود در محیط، رشد باکتری‌های گرم مثبت را سرکوب می‌کنند. ایرگاسان نیز باعث می‌شود رشد باکتری‌ها و قارچ های گرم مثبت به میزان بیشتری سرکوب شود.
ترکیب آنتی بیوتیک‌هایی مانند سفسولودین، ایرگاسان و نووبیوسین رشد بسیاری از باکتری‌های گرم منفی و گرم مثبت به جز یرسینیا انتروکولیتیکا را سرکوب می‌کند و به طور انتخابی به یرسینیا انتروکولیتیکا اجازه می‌دهد تا نسبت به سایر رقبا، رشد بیشتری در یرسینیا آگار داشته باشد.
سویه‌های یرسینیا انتروکولیتیکا قادر به تخمیر لاکتوز و تولید اسید هستند. به همین دلیل لاکتوز موجود در محیط به آسانی توسط Yersinia spp قابل تخمیر است. این تخمیر با تولید اسید، PH محیط را کاهش می‌دهد که توسط نشانگر قرمز خنثی موجود در محیط شناسایی می‌شود.
کنترل کیفیت محیط کشت CIN
پیش از استفاده از محیط کشت CIN حتما باید بررسی کنید که محیط کشت سالم باشد. توجه داشته باشید که پودر آماده نشده، زرد تا صورتی به نظر می‌رسد. در حالی که محیط آماده شده و جامد شده در پتری دیش به رنگ نارنجی، قرمز یا صورتی است.
pH محیط باید در دمای 25 درجه سانتیگراد 0.2 ± 7.4 باشد.
قبل از اتوکلاو کردن یا زمانی که دمای محیط بالای 50 درجه سانتیگراد یا کمتر از 40 درجه سانتیگراد است، مکمل انتخابی CTN را اضافه نکنید.
از آب مقطر استریل برای هیدراته کردن لوله حاوی مکمل انتخابی CTN استفاده کنید.
از مقدار مناسب مکمل انتخابی CTN استفاده کنید. در غیر این صورت احتمال رشد سایر باکتری‌ها در محیط کشت افزایش خواهد یافت.
بررسی رشد برخی باکتری‌های رایج در محیط کشت CIN
در جدول 2 به بررسی ویژگی‌های کلنی برخی باکتری‌ها در یرسینیا آگار خواهیم پرداخت.
|
رشد در محیط کشت CIN |
میکروارگانیسم |
| بدون رشد / بازدارندگی جزئی | Escherichia coli ATCC 25922 |
| بدون رشد / بازدارندگی جزئی | Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 |
| بدون رشد / بازدارندگی جزئی | Proteus mirabilis ATCC 25933 |
| بدون رشد / بازدارندگی جزئی | Salmonella typhimurium ATCC 14028 |
| بدون رشد | Enterococcus faecalis ATCC 29212 |
| بدون رشد | Staphylococcus aureus ATCC 25923 |
|
رشد مثبت، کلنی هایی به شکل چشم گاو مرکز قرمز تیره یا صورتی با حاشیه شفاف |
Yersinia enterocolitica ATCC 27729 |
محدودیت های CIN Agar
اگرچه محیط کشت CIN Agar برای تمایز گونههای یرسینیا بسیار کاربردی است. اما محدودیت‌هایی نیز دارد. به عنوان مثال:
- سایر گونههای یرسینیا مانند pseudotuberculosis، Yersinia frederiksenii، Y. kristensenii، Y. intermedia و غیره نیز می‌توانند در این محیط کشت رشد کنند و کلنی‌های مشابهی تولید کنند.
- سایر گونههای باکتری از جمله Aeromonas، Serratia liquefaciens، Citrobacter freundi و Enterobacter agglomerans نیز می‌توانند در این محیط کشت رشد کنند و کلنی‌های مشابهی تولید کنند.
- این محیط کشت فقط شناسایی اولیه را ارائه می‌دهد. به همین دلیل لازم است enterocolitica باید با استفاده از آزمایشات بیوشیمیایی یا ژنتیکی تایید شود.
سخن پایانی
همانطور که در این مطلب گفته شد، محیط کشت CIN Agar برای تمایز گونههای یرسینیا به ویژه یرسینیا انتروکولیتیکا کاربرد دارد. این باکتری می‌تواند سبب بروز علائمی از جمله اسهال حاد، التهاب غدد لنفاوی و درد شود. این باکتری در یرسینیا آگار به صورت دایره هایی با مرکز قرمز یا صورتی با هاله‌ای شفاف در اطراف دیده می‌شود.
البته تنها بررسی کلنی در این آگار نمی‌تواند با قطعیت وجود یرسینیا را نشان دهد. بلکه برای تایید تشخیص، آزمایشات بیوشیمیایی لازم خواهد بود.
امیدواریم این مطلب مورد توجه شما قرار گرفته باشد.
