تست فنیل آلانین آگار : اصول، روش و موارد استفاده

آیا با آزمایش آزمایش فنیل آلانین آگار آشنا هستید؟

آزمایش‌های بیوشیمیایی، به بررسی تفاوت‌ها در فعالیت بیوشیمیایی باکتری‌‌ها می‌پردازد و از این طریق گونه‌های مختلف را شناسایی می‌کند.  فیزیولوژی باکتری در بین گونه‌ها متفاوت است. تفاوت در متابولیسم کربوهیدرات، متابولیسم پروتئین، متابولیسم چربی، تولید آنزیم‌های خاص، توانایی استفاده از یک ترکیب خاص و غیره به شناسایی آن‌ها کمک می‌کند.

یکی از این آزمایش‌ها، آزمایش فنیل آلانین آگار است که توانایی گونه‌های خاصی را برای تبدیل اسید آمینه فنیل آلانین به اسید فنیل پیروویک، یک واکنش کلیدی برای تمایز اعضای انتروباکتریاسه، ارزیابی می‌کند. این آزمایش به طور خاص گروه پروتئوس و پروویدنسیا را از سایر انتروباکتریاسه‌هایی که این فعالیت را نشان نمی‌دهند متمایز می‌کند. در ادامه با ما باشید تا به بررسی این آزمایش بپردازیم.

هدف از این آزمایش

آزمایش فنیل آلانین آگار جهت ارزیابی ظرفیت یک ارگانیسم برای دآمینه زدایی اکسیداتیو فنیل آلانین به اسید فنیل پیروویک به کار می‌رود.  

این روش به تمایز باسیل‌های روده گرم منفی از طریق ظرفیت تولید فنیل پیروویک اسید از طریق دآمیناسیون اکسیداتیو کمک می‌کند و جنس‌های مورگانلا، پروتئوس و پروویدنسیا را از سایر انتروباکتریاسه‌ها متمایز می‌کند.

اصول انجام آزمایش فنیل آلانین آگار

فنیل آلانین آگار یا محیط فنیل آلانین دآمیناز حاوی مواد مغذی وDL  – فنیل آلانین است که به عنوان بستری برای آنزیم‌هایی عمل می‌کند که آن‌را به اسید فنیل پیروویک دآمینه می‌کنند. عصاره مخمر باعث رشد ارگانیسم می‌شود، در حالی که کلرید سدیم تعادل اسمزی را حفظ می‌کند.

میکروارگانیسم‌هایی که فنیل آلانین دآمیناز تولید می‌کنند، گروه آمین (NH2) را از فنیل آلانین حذف می‌کنند و در نتیجه (NH3) و فنیل پیروویک اسید تولید می‌شود. وجود اسید فنیل پیروویک با افزودن چند قطره ۱۰ درصد کلرید آهن نشان داده می‌شود که یک کمپلکس سبز را تشکیل می‌دهد که نشان دهنده مثبت بودن آزمایش است. اگر محیط به رنگ کاه باقی بماند، ارگانیسم برای تولید فنیل آلانین دآمیناز منفی است.

محیط کشت مورد استفاده برای این آزمایش چیست؟

برای آماده سازی محیط کشت به مواد و محلول‌های زیر نیاز است.

روش انجام آزمایش فنیل آلانین آگار

۱- با استفاده از یک لوپ یک کشت خالص ۱۸ تا ۲۴ ساعته را بردارید. روی محیط کشت، کشت خطی انجام دهید.  همچنین می‌توانید یک اسلنت کالچر را با یک قطره آبگوشت ۲۴ ساعته ایجاد کنید.

۲- محیط کشت را به صورت هوازی در دمای ۳۵ درجه سانتیگراد به مدت ۲۴-۱۸ ساعت انکوباسیون کنید.

۳- پس از انکوباسیون، ۴-۵ قطره محلول کلرید آهن ۱۰ درصد را به مایل اضافه کنید.

۴-  لوله را به آرامی هم بزنید. در صورت مشاهده رنگ سبز در عرض ۱-۵ دقیقه نتیجه مثبت است.

نتایج مورد انتظار

مثبت: در عرض ۱ تا ۵ دقیقه پس از افزودن کلرید آهن، رنگ سبز روی شیب ظاهر می‌شود. 

منفی: عدم وجود رنگ سبز نشان دهنده یک نتیجه منفی است که در عوض رنگ زرد از کلرید فریک را نشان می‌دهد.

محدودیت های تست فنیل آلانین آگار 

برای شناسایی دقیق، آزمایش‌های بیوشیمیایی، ایمونولوژیک، مولکولی یا طیف‌سنجی جرمی باید روی کلنی‌های حاصل از کشت خالص انجام شود. توجه داشته باشید که واکنش رنگ سبز یک آزمایش مثبت به سرعت محو می‌شود. بنابراین، نتایج باید در عرض ۵ دقیقه پس از اعمال کلرید آهن تفسیر شود تا از منفی کاذب جلوگیری شود.

سخن پایانی

آزمایش فنیل آلانین آگار روشی است برای تشخیص باکتری‌هایی که آنزیم فنیل آلانین آگار را تولید می‌کنند. این آنزیم، فنیل آلانین را به فنیل پیروویک اسید تبدیل می‌کند که با افزودن کلرید فریک، رنگ سبز ایجاد می‌کند. این آزمایش در طبقه‌بندی باکتری‌های انتروباکتریاسه بسیار مهم است و در تشخیص جنس‌هایی مانند پروتئوس، مورگانلا و پروویدنسیا کاربرد دارد. این آزمایش به ما کمک می‌کند تا برخی از انواع باکتری‌ها را براساس توانایی آن‌ها در تغییر یک ماده شیمیایی خاص شناسایی کنیم.