تست CAMP : اصول، کاربردها و تفسیر نتایج

تست CAMP مخفف عبارت Christie-Atkins-Munch-Peterson است. تست CAMP برای تشخیص گونه Streptococcus agalactiae از سایر گونه‌های استرپتوکوک بتا همولیتیک^[1]  استفاده می‌شود. در ادامه قصد داریم به بررسی این تست و اصول و کاربردهای آن بپردازیم.

تست CAMP چیست و چه کاربردی در آزمایشگاه دارد؟

CAMP مخفف اسامی کشف کننده این آزمون (Christie, Atkinson, Munch, and Peterson) است که در سال 1944 شناسایی شد. تست CAMP برای تشخیص گونه Streptococcus agalactiae از سایر گونه‌های استرپتوکوک بتا همولیتیک استفاده می‌شود.

استرپتوکوک آگالاکتیه عضوی از استرپتوکوک‌های گروه B Lancefield  است. S. agalactiae یک پاتوژن مهم است که باعث بیماری‌های مهاجم در انسان و ورم پستان در گاو می‌شود.

 این آزمایش برای شناسایی “سریع و قابل اعتماد” استرپتوکوک آگالاکتیه در آزمایشگاه بالینی موثر است. از آنجایی که نتیجه در کمتر از 18 ساعت ظاهر می‌شود و نیاز به دستکاری‌های کمی دارد، به ندرت نتایج مثبت کاذب ایجاد می‌شود.

برخی ارگانیسم‌ها (از جمله استرپتوکوک‌های گروه B) یک پروتئین همولیتیک خارج سلولی قابل انتشار در برابر حرارت (فاکتور CAMP) تولید می‌کنند. این پروتئین با بتا لیزین استافیلوکوک اورئوس به صورت هم افزایی عمل می‌کند و باعث افزایش لیز گلبول‌های قرمز خون می‌شود.

در این تست، استرپتوکوک‌های گروه B عمود بر رگه‌ای از استافیلوکوکوس اورئوس در آگار خون گوسفند قرار دارند. در صورتی که در مجاورت محلی که دو خط به هم نزدیک می‌شوند، ناحیه همولیز دیده شود، تست مثبت است.

موارد استفاده از تست CAMP

تست CAMP برای تشخیص گونه استرپتوکوک آگالاکتیه از سایر گونه‌های استرپتوکوک بتا همولیتیک استفاده می‌شود. این اصلی‌ترین کاربرد این تست است.

همچنین از آن برای شناسایی لیستریا مونوسیتوژنز (Listeria monocytogenes) استفاده می‌شود که واکنش CAMP مثبت ایجاد می‌کند.

مراحل آزمون CAMP

در ادامه روش برای انجام تست CAMP را بررسی خواهیم کرد.

روش استاندارد

ابتدا یک خط مستقیم از استافیلوکوکوس اورئوس تولید کننده بتا همولیزین در مرکز پلیت حاوی آگار خون ایجاد کنید.

سپس، یک رگه از ارگانیسم مورد آزمایش (استرپتوکوک بتا همولیتیک که باید شناسایی شود) عمود بر رگه استافیلوکوک تلقیح کنید. مراقب باشید که خط استافیلوکوک را قطع نکنید.

نکته: این رگه‌ها را به گونه‌ای بسازید که پس از انکوباسیون، رشد دو جاندار با هم تماس نداشته باشد.

طول رگه استرپتوکوک باید 3 تا 4 سانتی‌متر باشد.

به طور مشابه، سویه‌های استرپتوکوک شناخته شده گروه A و B را در همان پلیت با کنترل منفی و مثبت تلقیح کنید.

از برچسب زدن محل هر رگه در پشت صفحه اطمینان حاصل کنید.

در نهایت پلیت را در دمای 35 درجه سانتی گراد به مدت 18 الی 24 ساعت انکوبه کنید.

روش دیسک

ابتدا دیسک‌های حاوی بتا لیزین S.aureus را روی یک پلیت آگار خون قرار دهید.

سپس میکروارگانیسم‌ها را در فاصله 2 تا 3 میلی‌متری از لبه دیسک تلقیح کنید.

در نهایت پلیت را یک شب در دمای 35 درجه سانتیگراد در انکوباتور CO2 انکوبه کنید.

تفسیر نتایج تست CAMP

نتیجه مثبت: تشکیل یک پیکان از همولیز در تقاطع رگه‌های استافیلوکوک و ارگانیسم مورد آزمایش

اگر هر کوکسی گرم مثبت، کاتالاز منفی، بتا همولیتیک، مقاوم به باسیتراسین، مقاوم به تری متوپریم-سولفامتوکسازول چنین همولیز سر پیکانی را نشان دهد، می‌توان آن‌را به عنوان استرپتوکوک گروه بی (Streptococcus agalactiae) گزارش کرد.

در آزمایش دیسک، یک نتیجه مثبت با یک ناحیه هلالی یا قوس شکل متمایز از همولیز کامل در تقاطع دیسک بتا لیزین و ایزوله نشان داده می‌شود.

آزمایش منفی عدم وجود همولیز پیکانی شکل، در نزدیکی کلنی مورد آزمایش است.

چه ارگانیسم‌هایی CAMP مثبت هستند؟

علاوه بر Streptococcus agalactiae ،میکروارگانیسم های دیگری نیز وجود دارند که تست CAMP آن‌ها مثبت است. در زیر به مهم ترین آن‌ها اشاره شده است.

لیستریا مونوسیتوژنز (Listeria monocytogenes)

Rhodococcus equi

ویبریو کلرا (سویه‌های خاص)

گونه‌های خاصی از Corynebacterium.

کنترل کیفیت برای تست CAMP

هر آزمایش میکروبیولوژی مستلزم استفاده از کنترل های مثبت و منفی است. کنترل کیفیت تست CAMP نیز با استفاده از ارگانیسم های زیر انجام می‌شود.

مثبت: استرپتوکوک آگالاکتیه (ATCC13813) – همولیز پیکان شکل

منفی: استرپتوکوک پیوژنز (ATCC19615) – بتا همولیز بدون تشکیل نوک پیکان.

تست CAMP معکوس

تست CAMP معکوس^[2] واکنشی است که در آن همولیز توسط بتا-همولیزین استافیلوکوک‌ها توسط ارگانیسم‌هایی مانند S. agalactiae، لیستریا، Corynebacterium spp. و Clostridium perfringens مهار می‌شود. این عمل از طریق تولید فسفولیپاز C یا D انجام می‌شود.

اگر تست CAMP معکوس مثبت باشد، همولیز فلش در محل اتصال ارگانیسم مورد آزمایش با استافیلوکوک تشکیل نمی‌شود.

محدودیت‌های آزمون CAMP

درصد کمی از استرپتوکوک‌های گروه A ممکن است واکنش CAMP مثبت داشته باشند.

اگر پلیت در شرایط بی هوازی انکوبه شود، برخی از استرپتوکوک های گروه A تست CAMP مثبت خواهند شد. بنابراین انکوباسیون باید در دمای محیط انجام شود.

طولانی شدن زمان انکوباسیون یا افزایش دما ممکن است نتایج مثبت کاذب به همراه داشته باشد.

در تست CAMP باید تنها از پلیت آگار خون گوسفند استفاده شود. پلیت خون انسان، اسب، خرگوش یا خوکچه هندی واکنش مناسبی نشان نمی‌دهند.

کلنی های لیستریا مونوسیتوژنز دارای ناحیه باریکی از بتا همولیز در آگار خون گوسفند هستند. به همین دلیل اگر تست کاتالاز و رنگ آمیزی گرم انجام نشود، ممکن است با استرپتوکوک‌های بتا همولیتیک گروه B اشتباه گرفته شوند.

سخن پایانی

تست CAMP برای افتراق استرپتوکوکوس آگالاکتیه از سایر گونه‌های استرپتوکوک استفاده می‌شود. این آزمایش برای شناسایی لیستریا مونوسیتوژنز، که یک ارگانیسم CAMP مثبت است نیز کاربرد دارد. در این مطلب به بررسی اصول انجام این تست و نتایج ناشی از آن پرداختیم. امیدورایم این مطلب مورد توجه شما قرار گرفته باشد.

واژه نامه