تکنیک رنگ‌آمیزی روغن قرمز O برای لیپیدها

تجمع چربی (لیپید) اضافی در بافت‌های محیطی را می‌توان یکی از علل بروز بسیاری از بیماری‌های متابولیک به شمار آورد. به همین دلیل، تکنیک‌های رنگ‌آمیزی برای بررسی لیپیدها در بافت‌های مختلف اهمیت بالایی دارد. تکنیک رنگ‌آمیزی روغن قرمز o یا oil red O برای لیپیدها یکی از روش‌های کاربردی در آزمایشگاه‌های هیستوپاتولوژی است که به کمک آن می‌توان میزان لیپید و توزیع چربی در بافت‌ها را مورد ارزیابی قرار داد. به همین دلیل در این مطلب قصد داریم شما را با تکنیک رنگ‌آمیزی روغن قرمز O برای لیپیدها و روش انجام آن آشنا کنیم. پس در ادامه با ما همراه باشید.

مواد و محلول‌های مورد نیاز

برای آشنایی با تکنیک رنگ‌آمیزی روغن قرمز O برای لیپیدها، لازم است ابتدا مروری بر مواد و محلو‌های مورد استفاده در این روش داشته باشیم. لام به ذکر است که در این مطلب، بافت‌های فیکس نشده‌ی کرایواستات (Unfixed cryostat sections) و یا بافت‌های فریز شده که در فرمالین تثبیت شده‌اند در ابعاد ۱۰ میکرومتر برش خورده و مورد استفاده قرار می‌گیرند.

۱. فیکساتیو: بافر فرمالین خنثی ۱۰%

۲. استوک روغن قرمز O

• روغن قرمز او – (C.I. 26125) ………………………۰/۵ گرم
• ایزوپروپیل الکل ۹۹ %………………………………..۱۰۰/۰ میلی‌لیتر

۳. محلول کاربردی روغن قرمز O

• استوک روغن قرمز او …………………………………۶۰/۰ میلی‌لیتر
• دکسترین محلول در آب ۱ % ………………………. ۴۰/۰ میلی‌لیتر

پیش از استفاده از محلول چند روز صبر کنید و حتما قبل از استفاده آن را از کاغذ فیلتر عبور دهید.

۴. محلول ایزوپروپیل الکل ۶۰٪

• ایزوپروپیل الکل ۹۹%…………………………………..۶۰/۰ میلی‌لیتر
• آب مقطر…………………………………………………۴۰/۰ میلی‌لیتر

۵. سدیم بورات ۰/۳ %

• سدیم بورات (Na₂ B₄ O₇ 10H₂O) ………………….. ۰/۳ گرم
• آب مقطر……………………………………………. ۱۰۰/۰ میلی‌لیتر

روش رنگ آمیزی

۱. بافت‌های کرایواستات را روی لام آزمایشگاهی قرار داده و ۱۵دقیقه درون بافر فرمالین خنثی ۱۰% قرار دهید تا فیکس شود. بافت‌های فریز شده که در فرمالین تثبیت شده‌اند را در آب قرار داده و سپس آن‌ها را روی لام آلبومینه قرار دهید. یک الی دو ساعت صبر کنید تا لام خشک شود.

توجه: برای ثابت نگه داشتن بافت روی لام حین رنگ‌آمیزی ممکن است از مواد مختلفی استفاده شود. آلبومین ماده‌ای است که چسبندگی نمونه را به لام شیشه ای حین رنگ آمیزی افزایش می‌دهد.

۲. لام‌ها را با آب مقطر آبکشی کنید.

۳. لام را چند مرتبه در ایزوپروپیل الکل ۶۰% فرو ببرید.

۴. لام را به مدت ۲۰دقیقه درون محلول روغن قرمز O قرار دهید.

۵. لام را مجددا چند مرتبه در ایزوپروپیل الکل ۶۰% فرو ببرید.

۶. لام را ۴ مرتبه با آب مقطر آبکشی کنید.

۷. رنگ‌آمیزی متقابل (Counterstain) با رنگ هماتوکسیلین لیلی مایر اسیدی شده به مدت ۱ دقیقه انجام می‌شود.

۸. لام را سه مرتبه با آب مقطر آبکشی کنید.

۹. لام را به مدت ۱۵دقیقه درون سدیم بورات ۰/۳ قرار دهید.

۱۰. مجددا لام را ۴ مرتبه با آب مقطر آبکشی کنید.

۱۱. در نهایت روی لام گلیسیرین ریخته و آن‌را زیر میکروسکوپ بررسی کنید.

نتایج رنگ آمیزی به روش روغن قرمز O

• لیپیدها ……………………………………………………. قرمز
• هسته ……………………………………………………… آبی

توضیحات

۱.  بر اساس تجربیات، تکنیک رنگ آمیزی روغن قرمز O با استفاده از ایزوپروپیل الکل نسبت به روش‌های انجام شده با پروپیلن گلیکول (propylene glycol)، الکل-استون (alcohol-acetone) یا تری اتیل فسفات (triethylphosphate) نتایج بهتری می‌دهد.

۲. روغن قرمز O نسبت به سودان III و سودان IV برای رنگ آمیزی لیپیدها در مقاطع بافتی ارجحیت دارد.

۳. استفاده از محلول آبی دکسترین ۱٪ آبی به جای آب مقطر، در تهیه محلول روغن قرمز O باعث تثبیت و تشدید رنگ‌آمیزی می‌شود.

جمع‌بندی

همانطور که در قسمت مقدمه نیز گفته شد، تکنیک رنگ‌آمیزی روغن قرمز O یک روش مهم آزمایشگاهی برای رنگ‌آمیزی بافت و بررسی چربی یا لیپید تجمع ‌یافته در بافت است. در این مطلب سعی کردیم تا مروری بر این تکنیک رنگ‌آمیزی، مراحل انجام آن، مواد و محلول‌های مورد استفاده و نتایج حاصل از رنگ‌آمیزی روغن قرمز O را بررسی کنیم. امیدواریم این مطلب مورد توجه شما قرار گرفته باشد.